二油酰基 L-α-磷脂酰乙醇胺（DOPE，CAS 4004-05-1，分子式 C₄₁H₇₈NO₈P）是一种具有强负曲率倾向的天然磷脂。其分子由亲水的磷酸乙醇胺头基和两条不饱和油酰基链构成。由于头基横截面积远小于疏水尾链，DOPE 在水合状态下并非理想的双层形成脂质，而是倾向于自组装为反六角相（HII）。这一相行为特点使其在脂质体递送、膜融合及 pH 响应释放等场景中具有特殊价值，但同时也给传统脂质体的构建带来困难。
胆固醇（C₂₇H₄₆O）是调节膜物理化学性质的关键甾醇。其分子具有刚性的四环甾核、一个极性羟基和一条短支链，整体几何形状呈倒锥形。在磷脂双层中，胆固醇的羟基定位于膜界面的含水区域，甾核则深入疏水链区，与相邻脂质的酰基链发生紧密的范德华相互作用。胆固醇的这一插入方式能够填充脂质分子链间的自由体积，减少脂双层中的瞬时空腔，从而显著降低膜的渗透性和流动性，增强膜的力学稳定性。
DOPE 与胆固醇联用时，胆固醇分子有效嵌插于 DOPE 的两条油酰链之间。油酰链的顺式双键在链中部形成刚性扭结，产生局部松散区域，而胆固醇的刚性甾环能够限制这种扭结的摆动，使烃链的有序度上升。同时，胆固醇的 3β-羟基与 DOPE 的乙醇胺头基及磷酸酯氧原子之间形成氢键网络，进一步巩固界面结构。这一组合在生理 pH 和 37 ℃ 条件下抑制了 DOPE 自发的 HII 相变，使混合体系能够稳定形成层状脂质体。然而，胆固醇并非仅仅被动地稳定膜结构。当环境 pH 下降时，DOPE 的伯胺基发生质子化，头基水合能力增强，界面氢键网络被破坏，膜表面的负曲率势能重新占据主导，胆固醇填充效应不足以抵御这种变化，膜随即发生失稳并形成反六角相，这一特性正是 pH 敏感脂质体实现内体逃逸的基础。
最佳摩尔比的确定需同时考虑膜的稳定性与 pH 敏感性之间的平衡。实验与热力学分析表明，DOPE 与胆固醇的最佳摩尔比为 60:40，即 3:2。在该比例下，胆固醇摩尔分数为 40%，每一个胆固醇分子平均对应 1.5 个 DOPE 分子。胆固醇的甾环能插入相邻 DOPE 链间空隙，有效补偿 DOPE 的负固有曲率，使体系在生理条件下呈现稳定的双层液晶相。同时，由于胆固醇未完全占据所有可能的填充位点，当 pH 触发时，DOPE 仍保留足够的 HII 相形成能力，从而快速实施膜结构破坏。若胆固醇摩尔分数低于 30%，DOPE 的负曲率占优，脂质体在制备或储存过程中即发生融合与泄漏，无法形成稳定囊泡；若胆固醇摩尔分数高于 50%，过量的胆固醇将完全锁定层状相，膜刚性过高，失去 pH 诱导的相变能力，内体逃逸效率几乎丧失。因此，60:40 是兼具膜稳定性和环境响应性的唯一最佳平衡点。
在实际应用中，该比例广泛用于构建 pH 敏感脂质体，以实现细胞内药物或核酸的胞质递送。DOPE 在低 pH 下形成六角相，触发脂质体与内体膜融合，而胆固醇则保证了脂质体在血液循环中的完整性与低渗漏性。对于化学从业者，配制该配方的标准流程为：将 DOPE 与胆固醇以 3:2 摩尔比溶于氯仿，旋转蒸发形成均匀脂膜，真空干燥后以缓冲液水化，通过反复挤出制备单层脂质体。所得脂质体在 pH 7.4 时稳定，在 pH 5.0 环境下迅速释放内容物。该配伍与比例已成为脂质递送系统设计中可重复、确定性的基础参数。