瑞卡帕布-作用-生物活性-瑞卡帕布靶点活性

瑞卡帕布，英文名Rucaparib，别名AG-014699或者PF-01367338。它是一种RARP的抑制剂，对PARP1的Ki为1.4 nM。它还表现出对其他八个PARP结构域的结合亲和力。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍瑞卡帕布的生物活性：

1）体外活性
瑞卡帕布是酶测定中最有效的PARP抑制剂（Ki，1.4 nM），可能是AG14644的N-去甲基化代谢物[1]。瑞卡帕布的放射增敏是由于NF-κB活化的下游抑制，并且与SSB修复抑制无关。瑞卡帕布可以靶向由DNA损伤激活的NF-κB，并克服经典NF-κB抑制剂观察到的毒性，而不会损害其他重要的炎症功能[2]。在透化的D283Med细胞中，瑞卡帕布在浓度为1μM时抑制PARP-1活性97.1％[3]。

2）体内活性
瑞卡帕布和AG14584显着（P <0.05）增加替莫唑胺的毒性。瑞卡帕布（1 mg / kg）显着增加替莫唑胺引起的体重减轻。瑞卡帕布（0.1 mg / kg）导致替莫唑胺诱导的肿瘤生长延迟增加50％[1]。瑞卡帕布无毒，但在DNA修复蛋白质感受力的D384Med异种移植物中显着增强替莫唑胺诱导的TGD。药代动力学研究还表明瑞卡帕布在脑组织中被检测到，这表明瑞卡帕布在颅内恶性肿瘤治疗中具有潜力[3]。瑞卡帕布显着增强拓扑替康和替莫唑胺在NB-1691，SH-SY-5Y和SKNBE（2c）细胞中的细胞毒性。瑞卡帕布增强替莫唑胺的抗肿瘤活性，表明NB1691和SHSY5Y异种移植物完全和持续的肿瘤消退[4]。

我们已经了解了瑞卡帕布的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：

1）细胞实验
成神经管细胞瘤细胞系分别以1×103,3×103和3×103的密度接种在96孔板中。在接种后24小时（D384Med）或48小时（D283Med和D425Med），在存在或不存在0.4μM瑞卡帕布的情况下将细胞暴露于各种浓度的替莫唑胺。在培养3天（D425Med和D384Med）或5天（D283Med）后，通过XTT细胞增殖试剂盒测定评估细胞活力。细胞生长表示为相对于DMSO或0.4μM瑞卡帕布单独对照的百分比。计算单独或与瑞卡帕布组合的替莫唑胺的浓度，其抑制生长50％（GI50）。增强因子50（PF50）定义为在瑞卡帕布存在下替莫唑胺的GI50与单独的替莫唑胺的GI50的比率。

2）动物实验
口服给予单剂量的替莫唑胺。作为200mg / kg的盐水悬浮液，单独使用或与单次i.p.组合使用。给予PARP抑制剂0.1 [瑞卡帕布和MS-AG14644（仅相当于0.078 mg / kg游离AG14644）]，1.0和10 mg / kg（甲磺酸盐相当于0.79和7.9 mg / kg游离AG14451和AG14452） 和0.78和7.8自由AG14531和AG14644）。对照动物用生理盐水p.o处理。和i.p或生理盐水p.o和PARP抑制剂10mg / kg i.p.

3）激酶实验
与仅DMSO相比，使用各种浓度的瑞卡帕布（0-1μM）测量5×103D28383Med细胞中PARP活性的抑制。通过免疫学在透化细胞的样品中测量最大刺激的PARP活性。

今天介绍了瑞卡帕布的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，瑞卡帕布Rucaparib(AG-014699, PF-01367338)是有效可口服的 PARP1/2/3 抑制剂，结合PARP1的Ki为1.4 nM，对PARP其余亚型也有亲和性。它的靶点活性是PARP,1.4nM(Ki)。

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参考文献：
[1]. Thomas HD, et al. Preclinical selection of a novel poly(ADP-ribose) polymerase inhibitor for clinical trial. Mol Cancer Ther, 2007, 6(3), 945-956.
[2]. Hunter JE, et al. NF-κB mediates radio-sensitization by the PARP-1 inhibitor, AG-014699. Oncogene, 2012, 31(2), 251-264.
[3]. Daniel RA, et al. Central nervous system penetration and enhancement of temozolomide activity in childhood medulloblastoma models by poly(ADP-ribose) polymerase inhibitor AG-014699. Br J Cancer, 2010, 103(10), 1588-1596.
[4]. Daniel RA, et al. Inhibition of poly(ADP-ribose) polymerase-1 enhances temozolomide and topotecan activity against childhood neuroblastoma. Clin Cancer Res, 2009, 15(4), 1241-1249.