奥拉帕尼-作用-生物活性-奥拉帕尼靶点活性

奥拉帕尼，英文名Olaparib，别名AZD2281。它是核酶聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）的小分子抑制剂，具有潜在的化学增敏作用，放射增敏作用和抗肿瘤作用。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍奥拉帕尼的生物活性：

1）体外活性
奥拉帕尼（AZD2281）是PARP-1和PARP-2的单位数纳摩尔抑制剂，显示出对抗BRCA1缺陷的乳腺癌细胞系的独立活性。奥拉帕尼应用于SW620细胞裂解液，并确定PARP-1抑制的IC50约为6 nM，PARP-1活性的总消融浓度为30-100 nM [1]。

2）体内活性
带有SW620异种移植肿瘤的动物用奥拉帕尼（10mg / kg，口服）与替莫唑胺（TMZ）（50mg / kg，口服）联合治疗，每天一次，连续5天，之后肿瘤继续生长[1]]。奥拉帕尼增加了在DWC模型中建立的Calu-6肿瘤中的血管灌注。给予奥拉帕尼（50mg / kg，口服）作为单一药剂（上图）或与放射组合（下图）导致Calu-6肿瘤中荧光强度的增加[2]。

我们已经了解了奥拉帕尼的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：

1）动物实验
小鼠[2]-将携带220-250mm 3肿瘤的小鼠随机分成4个治疗组（n = 5）：A; 载体对照（PBS中10％DMSO / 10％2-羟基 - 丙基-β-环糊精，每天口服强饲5天），B; 奥拉帕尼（通过口服强饲法每天50mg / kg，持续5天），C; 10 Gy分次放疗（每日2 Gy，连续5天），D; 奥拉帕尼和10 Gy（5×2 Gy）分次放疗（每天2 Gy剂量放射前30分钟给予奥拉帕尼）。每天测定肿瘤体积测量值，直至达到1000mm 3。对于每组中的个体肿瘤，计算每个肿瘤从治疗开始时的四倍大小的天数（相对肿瘤体积×4; RTV4）。

2）激酶实验
该测定确定了奥拉帕尼抑制PARP-1酶活性的能力。通过使用PARP-1测定的变体测量PARP-2活性抑制，其中PARP-2蛋白（重组体）在96孔白壁板中被PARP-2特异性抗体结合。在3H-NAD + DNA添加后测量PARP-2活性。洗涤后，加入闪烁剂以测量掺入3H的核糖基化。对于端锚聚合酶-1，开发了AlphaScreen测定法，其中在384孔ProxiPlate测定中将HIS标记的重组TANK-1蛋白与生物素化的NAD +一起温育。添加α珠以结合HIS和生物素标签以产生接近信号，而TANK-1活性的抑制与该信号的损失成正比。所有实验至少重复三次[1]。

3）细胞实验
PF50值是增强因子，其计算为对照生长与烷化剂甲基甲磺酸盐（MMS）的IC50除以MMS与PARP抑制剂组合的IC50的比率。使用HeLa B细胞，并以固定的200nM浓度测试奥拉帕尼用于MMS筛选。对于在SW620结肠直肠细胞系上测试奥拉帕尼，使用的浓度为1,3,10,100和300nM。通过使用磺酰罗丹明B（SRB）测定来评估细胞生长[1]。

今天介绍了奥拉帕尼的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，奥拉帕尼Olaparib是一种有效的 PARP 抑制剂，抑制 PARP-1 和 PARP-2 的 IC50 分别为 5 和 1 nM。它的靶点活性是PARP1,5nM；PARP2,1nM。

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参考文献：
[1]. Menear KA, et al. 4-[3-(4-cyclopropanecarbonylpiperazine-1-carbonyl)-4-fluorobenzyl]-2H-phthalazin-1-one: a novel bioavailable inhibitor of poly(ADP-ribose) polymerase-1. J Med Chem. 2008 Oct 23;51(20):6581-91
[2]. Senra JM, et al. Inhibition of PARP-1 by olaparib (AZD2281) increases the radiosensitivity of a lung tumor xenograft.Mol Cancer Ther. 2011 Oct;10(10):1949-58.
[3]. Yasukawa M, et al. Synergetic Effects of PARP Inhibitor AZD2281 and Cisplatin in Oral Squamous Cell Carcinoma in Vitro and in Vivo. Int J Mol Sci. 2016 Feb 24;17(3):272.
[4]. Bian X, et al. PTEN deficiency sensitizes endometrioid endometrial cancer to compound PARP-PI3K inhibition but not PARP inhibition as monotherapy. Oncogene. 2018 Jan 18;37(3):341-351.