伊斯平斯的作用 - 生物活性 - 靶点活性

伊斯平斯，英文名Ispinesib，CAS号是336113-53-2。它是一种选择性，有效和可逆的驱动蛋白纺锤体蛋白（KSP）抑制剂，来自喹唑啉酮，具有抗肿瘤特性。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍伊斯平斯的生物活性：

1）体外活性
伊斯平斯是一种有效的，高度特异性的KSP抑制剂，Ki app为1.7 nM [1]。伊斯平斯（150 nM）抑制BT-474和MDA-MB-468细胞系，GI50分别为45和19 nM [2]。伊斯平斯（SB715992,15和30 nM）抑制PC-3前列腺癌细胞增殖48.65％和52.16％，并分别诱导前列腺癌细胞凋亡1094.88％和1516.70％。伊斯平斯 up调节负责细胞凋亡和细胞周期停滞的基因，并下调负责细胞增殖和存活的基因。金雀异黄素可以增强伊斯平斯的抗增殖和促凋亡活性[3]。

在PC-3前列腺癌细胞中， 伊斯平斯（5 nM 和 30 nM）通过调节信号的基因表达水平，抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡。在乳腺癌细胞系中, 伊斯平斯（7.4 nM–600 nM）具有广谱抑制活性。在肿瘤细胞系中（Colo205, Colo201, HT-29, M5076, Madison-109,和MX-1），伊斯平斯（IC50=1.2-9.5 nM） 具有很强细胞毒性。

2）体内活性
伊斯平斯（SCID，8 mg / kg;裸剂，10 mg / kg，q4d×3）可降低携带ER阳性（MCF7），HER2阳性（KPL4，HCC1954和BT-474）肿瘤异种移植物的小鼠的肿瘤体积， 通过ip进行三重阴性（MDA-MB-468）乳腺癌细胞 每4天一次剂量重复三次[2]。

携带移植瘤的小鼠模型， 伊斯平斯（4.5-15 mg/kg）能够抑制Colo205, Colo201, HT-29细胞生长。在小鼠实体瘤中，用伊斯平斯处理（6 -10 mg/kg ），Madison 109肺癌, M5076肉瘤,及L1210和P388白血病能够被抑制。携带乳腺癌细胞MCF-7, HCC1954, MDA-MB-468,和KPL4移植瘤的小鼠中,伊斯平斯（8-10 mg/kg ）抑制肿瘤生长。

我们已经了解了伊斯平斯的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：

1）细胞实验
将PC-3前列腺癌细胞以4×103细胞/孔的密度接种在96孔板中。将PC-3细胞温育24小时，以使其附着于组织培养板的每个孔的表面。然后，用不同浓度的试剂处理细胞并孵育1至3天。首先，分别用15和30nM的伊斯平斯处理PC-3细胞。其次，用7.5或10nM的伊斯平斯加30μM的染料木黄酮对PC-3细胞进行组合处理。最后，用30μM染料木黄酮预处理PC-3细胞24小时，然后用15nM的伊斯平斯处理。用0.3mM Na 2 CO 3（载体对照）处理对照细胞。处理后，将PC3细胞在37℃下与MTT（0.5mg / mL）一起温育2小时，并在室温下将异丙醇温育1小时。然后通过使用ULTRA多功能微板读数器在595nm处测定每个样品的分光光度吸光度[3]。

2）动物实验
肿瘤体积为~250mm 3的小鼠接受单剂量的伊斯平斯（10mg / kg）。解剖肿瘤，固定在10％缓冲的福尔马林中，并包埋在石蜡中，制备5-μm组织切片。通过在50mM柠檬酸盐缓冲液（pH5.5）中煮沸来进行抗原修复，然后将切片在3％过氧化氢中温育，在PBS-0.1％Tween中洗涤，并在10％山羊血清中封闭。使用Alexa Fluor 488二抗检测磷酸 - 组蛋白H3（PH3）抗体。用显微镜以×10放大率拍摄图像，并使用MetaMorph软件捕获图像，通过计算每个总细胞的PH3阳性细胞的面积比来量化PH3表达。完成Ki67 /切割的胱天蛋白酶-3染色。非荧光图像在Olympus BX41显微镜上以×20放大倍数拍摄[2]。

3）激酶实验
使用丙酮酸激酶 - 乳酸脱氢酶检测系统进行驱动蛋白特异性分析，该系统将ADP的产生与NADH的氧化偶联。在340nm处监测吸光度变化。使用纳摩尔浓度的KSP的稳态研究使用基于灵敏荧光的测定进行，所述测定利用丙酮酸激酶，丙酮酸氧化酶和辣根过氧化物酶偶联检测系统，其将ADP的产生与Amplex Red的氧化偶联至荧光试卤。通过荧光监测试卤灵的产生（λ激发= 520nm和λemission= 580nm）。在补充有10μM紫杉醇的PEM25缓冲液[25mM Pipes-K +（pH 6.8），2mM MgCl 2,1mM EGTA]中进行稳态生化实验，用于涉及微管的实验。在PEM25缓冲液中以500μMATP，5μMMT和1nM KSP测定稳态抑制的IC 50。从浓度 - 响应曲线中提取伊斯平斯的Ki app（表观抑制剂解离常数）估计值，并对酶浓度进行明确校正[1]。

今天介绍了伊斯平斯的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，伊斯平斯Ispinesib是一种特异性的 KSP 抑制剂，Ki app 值为 1.7 nM。它的靶点活性是KSP (HsEg5),1.7nM(Kiapp)。

您可能想了解伊斯平斯的物理化学性质https://www.chemsrc.com/cas/336113-53-2_672621.html。如果您有其他资讯方面的需求，请和化源网联系。

参考文献：
[1]. Lad L, et al. Mechanism of inhibition of human KSP by ispinesib. Biochemistry. 2008 Mar 18;47(11):3576-85.
[2]. Purcell JW, et al. Activity of the kinesin spindle protein inhibitor ispinesib (SB-715992) in models of breast cancer. Clin Cancer Res. 2010 Jan 15;16(2):566-76.
[3]. Davis DA, et al. Increased therapeutic potential of an experimental anti-mitotic inhibitor SB715992 by genistein in PC-3 human prostate cancer cell line. BMC Cancer. 2006 Jan 24;6:22.