莫特塞尼的作用和生物活性

莫特塞尼是一种口服生物可利用的受体酪氨酸激酶抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性，也叫AMG706。莫特塞尼选择性地靶向和抑制血管内皮生长因子（VEGFR），血小板衍生生长因子（PDGFR），Kit和Ret受体，从而抑制血管生成和细胞增殖。那么它的生物活性是什么？如何做实验呢？下面让小编给您详细说明。

首先我们介绍莫特塞尼的生物活性：

1）体外活性
莫特塞尼对人VEGFR家族具有广泛的活性，对EGFR，Src和p38激酶的选择性>1000。莫特塞尼显着抑制VEGF诱导的HUVEC细胞增殖，IC50为10nM，而对bFGF诱导的增殖几乎没有影响，IC50>3,000nM。

莫特塞尼还有效抑制PDGF诱导的增殖和SCF诱导的c-kit磷酸化，IC50分别为207nM和37nM，但对EGF诱导的EGFR磷酸化和A431细胞的细胞活力无效[1]。虽然单独使用HUVECs对细胞生长几乎没有抗增殖活性，但莫特塞尼治疗可使细胞对分次辐射敏感[2]。

2）体内活性
莫特塞尼（100mg/kg）以时间依赖性方式显着抑制VEGF诱导的血管通透性。每天两次口服莫特沙尼或每天一次有效地以剂量依赖性方式使用大鼠角膜模型抑制VEGF诱导的血管生成，ED50分别为2.1mg/kg和4.9mg/kg。通过选择性靶向肿瘤细胞中的新血管形成，莫特塞尼诱导已建立的A431异种移植物的剂量依赖性肿瘤消退[1]。

莫特塞尼与放射联合在头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）异种移植模型中显示出显着的抗肿瘤活性[2]。莫特沙尼治疗还诱导MCF-7，MDA-MB-231或Cal-51异种移植物的肿瘤生长和血管密度的显着剂量依赖性降低，当与多西紫杉醇或他莫昔芬组合时，其可显着增强[3]。

我们已经了解了它的生物活性，接下来如何做活性实验呢？一般来说，有如下的三种方法：

1）动物实验
将A431细胞在含有10％FBS和青霉素/链霉素/谷氨酰胺的DMEM（低葡萄糖）中培养。通过胰蛋白酶消化收获细胞，洗涤，并在无血清培养基中调节至5×107/mL的浓度。动物受到攻击。左侧腹侧有0.2×1×10×10个细胞。大约10天后，基于初始肿瘤体积测量将小鼠随机化并用载体（Ora-Plus）或莫特塞尼处理。

每周两次和/或在处死当天记录肿瘤体积和体重。用Pro-Max电子数字卡尺测量肿瘤体积，并使用公式长度（mm）×宽度（mm）×高度（mm）计算并以mm3表示。数据表示为平均值±SE。重复测量ANOVA，然后使用Scheffe事后检验进行多重比较，用于评估观察到的差异的统计学显着性。

2）细胞实验
用不同浓度的莫特塞尼预孵育细胞2小时，并用50ng/mLVEGF或20ng/mLbFGF再暴露72小时。用DPBS洗涤细胞两次，并将板在-70℃下冷冻24小时。通过添加CyQuant染料评估增殖，并在Victor1420工作站上读取平板。使用Levenberg-Marquardt算法将IC50数据计算为四参数逻辑方程。

3）激酶实验
使用均相时间分辨荧光（HTRF）测定法为每种酶建立最佳酶，ATP和底物（胃泌素肽）浓度。使用每种酶的ATP浓度为三分之二Km，对每种酶以10点剂量反应曲线测试莫特塞尼。大多数测定由与激酶反应缓冲液[20mMTris-HCl（pH7.5），10mMMgCl2,5mMMnCl2,100mMNaCl，1.5mMEGTA]混合的酶组成。

在每次测定之前加入终浓度为1mMDTT，0.2mMNaVO4和20μg/mLBSA。对于所有测定，在HTRF反应之前立即加入5.75mg/mL链霉抗生物素蛋白-别藻蓝蛋白和0.1125nMEu-PT66。将板在室温下孵育30分钟并在Discovery仪器上读数。使用Levenberg-Marquardt算法将IC50值计算为四参数逻辑方程。

今天介绍了莫特塞尼的作用，并且详细地说明了它的生物活性和实验方法。综上所述，莫特塞尼是一种有效的VEGFR1/2/3的ATP竞争性抑制剂，IC50值为2nM/3nM/6nM，与对Kit的选择性相似，是PDGFR和Ret的10倍多。莫特塞尼的靶点活性为VEGFR1,2nM；VEGFR2,3nM；VEGFR3,6nM。

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参考文献：
[1]. Polverino A, et al. AMG 706, an oral, multikinase inhibitor that selectively targets vascular endothelial growth factor, platelet-derived growth factor, and kit receptors, potently inhibits angiogenesis and induces regression in tumor xenografts. Cancer R
[2]. Kruser TJ, et al. Augmentation of radiation response by motesanib, a multikinase inhibitor that targets vascular endothelial growth factor receptors. Clin Cancer Res, 2010, 16(14), 3639-3647.
[3]. Coxon A, et al. Broad antitumor activity in breast cancer xenografts by motesanib, a highly selective, oral inhibitor of vascular endothelial growth factor, platelet-derived growth factor, and Kit receptors. Clin Cancer Res, 2009, 15(1), 110-118.