| 描述 |
Neurotensin (8-13) 是神经降压素的活性片段,Neurotensin (8-13) 降低细胞表面NT1受体 (NTR1) 密度。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
NTR1[1]
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| 体外研究 |
由神经降压素(8-13)诱导的受体内化导致细胞表面NT1受体(NTR1)密度降低。已经描述了响应于肽的高细胞外浓度的受体下调,用于HT-29细胞和大鼠原代培养神经元中的神经降压素(NT)。细胞表面受体的再现也不同[1]。
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| 激酶实验 |
在汇合时对整个HT-29细胞进行结合测定。在测定前一天，将细胞（106个细胞/0.4mL，相当于0.3mg蛋白质）置于48孔板中。一种特殊的结合缓冲液，包括蛋白酶抑制剂（50 mM HEPES，125 mM NaCl，7.5 mM KCl，5.5 mM MgCl 2,1 mM EGTA，5 g / L牛血清白蛋白，2 mg / L chymostatin，100 mg / L大豆胰蛋白酶抑制剂，50mg / L杆菌肽，pH7.4）用于实验。在抑制研究中，将细胞在37℃下一式三份与25,000cpm的125I-NT和可变浓度（0.001-3,000nM）的未标记的NT（8-13），未标记的NT-VIII或NT-VIII一起温育1小时。用natRe标记（最终体积为每孔0.2mL）。然后用冷结合缓冲液洗涤细胞两次，然后在37℃下用1N NaOH溶解（每孔0.4mL）。活性在γ计数器中确定。在饱和度研究中，将细胞与增加浓度（0.1-10nM）的99m Tc（CO）3NT-VIII一起在37℃孵育1小时（最终体积，每孔0.2mL）。总锝浓度（99 + 99mTc）相当于每孔0.2-20MBq 99mTc活性。用与之前相同的结合缓冲液洗涤2次后，然后将细胞用1N NaOH在37℃溶解（每孔0.4mL）。在γ-计数器中测量结合的放射性。用1μM未标记的NT（8-13）[1]测定非特异性结合。
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| 参考文献 |
[1]. García-Garayoa E, et al. Preclinical evaluation of a new, stabilized neurotensin(8--13) pseudopeptide radiolabeled with (99m)tc. J Nucl Med. 2002 Mar;43(3):374-83.
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