| 体外研究 |
铜传感器1(CS1)包含硼二吡咯烷(BODIPY)生色团与富含硫醚的受体偶联,对Cu+具有皮摩尔亲和力,对竞争性细胞金属离子具有高选择性。CS1荧光在与Cu+结合时增加10倍[1]。准则[1](以下是我们建议的方案。本协议仅提供指南,应根据您的具体需要进行修改)。将铜传感器1(CS1)溶解在二甲基亚砜中,以获得1 mM储备溶液,并在使用前进一步稀释。2.细胞在培养基中生长,添加10 mM CuCl2储备溶液,最终铜浓度为100μM,并培养1-8 h。3.添加竞争性螯合剂(N-乙基-3,6,12,15-四硫-9-单氮杂庚烷;100 mM)添加到补充铜的电池中,以获得500μM的最终螯合剂浓度。充分混合,并在25°C的条件下在黑暗中培养5分钟(与铜补充剂相比,螯合剂过量5-10倍可获得最佳结果)。将细胞与1 mM Coppersensor 1溶液孵育,以获得5 mM的最终染料浓度。充分搅拌(较高浓度的染料可能会导致高水平的背景荧光。)在25°C或37°C的黑暗中培养5-20分钟。CS1可以使用任何类型的荧光显微镜成像,包括荧光显微镜、共焦显微镜和多光子显微镜。对于标准共焦实验,在543 nm激发下获得最佳结果,以匹配apo和Cu+结合探针的最大吸收。
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