BFH772

BFH772 是一种口服有效的 VEGFR2 抑制剂,IC50 为 3 nM。

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VEGFR2:3 nM (IC50)

BFH772具有高选择性;除了在3nM IC50下抑制VEGFR2外,它还靶向B-RAF,RET和TIE-2,尽管效力至少低40倍。对于测试的所有其他酪氨酸特异性和丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶,BFH772无活性(IC50>10μM; cKIT>2μM)。 BFH772在CHO细胞中抑制VEGFR2,IC50为4.6±0.6 nM。 BFH772在HUVEC细胞中抑制VEGFR2,IC50为3 nM。 BFH772抑制配体诱导的RET,PDGFR和KIT激酶的自身磷酸化,IC50值在30和160nM之间。 BFH772针对EGFR,ERBB2,INS-R和IGF-1R的激酶以及针对细胞质BCR-ABL激酶的选择性(IC50值>0.5μM)。 BFH772的IC50(<0.01 nM,n = 2)表明它们在非常低的nM浓度下消除了VEGF诱导的增殖[1]。

每天口服一次3mg/kg的BFH772有效抑制黑素瘤生长(原发肿瘤为54-90％,转移生长为71-96％),如通过治疗对照比例所示。 BFH772在0.3,1和3 mg/kg时的剂量-反应曲线表明即使在最低浓度下,这种萘-1-甲酰胺也能抑制VEGF诱导的组织重量和TIE-2水平,但仅在1 mg/kg时达到统计学显着性。以上[1]。

体外激酶测定基于过滤器结合测定，使用在杆状病毒中表达的重组GST-融合激酶结构域并在谷胱甘肽 - 琼脂糖凝胶上纯化，γ-[33P] ATP作为磷酸供体，和聚（Glu：Tyr 4：1） ）肽作为受体。每个GST融合激酶在优化的缓冲液条件下孵育[20mM Tris-HCl缓冲液（pH 7.5），1-3mM MnCl 2,3-10mM MgCl2,3-8μg/ mL聚（Glu：Tyr 4：1） ，在环境中或不存在测试物质的情况下，在环境温度下，在30μL总体积中，0.25 mg / mL聚乙二醇20000,8μMATP，10μM钒酸钠，1 mM DTT]和0.2μCiγ-33P ATP温度。加入10mL 250mM EDTA终止反应。使用384孔过滤系统，将一半体积转移到Immobilon-聚偏二氟乙烯膜上。然后将膜彻底洗涤并干燥，并进行闪烁计数。化合物的IC50通过抑制百分比的线性回归分析计算[1]。

通过用各种组成型活性酪氨酸激酶的转导使不同的Ba / F3细胞系呈现IL-3独立，在含有10％胎牛血清的RPMI 1640培养基中生长。为了维持亲本Ba / F3细胞，培养基另外补充10ng / mL白细胞介素-3（IL-3）。对于增殖测定，将Ba / F3细胞一式三份接种于96孔板上，每孔10000个细胞，并与不同浓度的化合物一起孵育72小时，然后使用刃天青钠盐染料还原读数定量活细胞（商业上称为Alamar Blue测定）。使用XLFit Excel插件使用四参数剂量反应模型[1]确定IC50。

小鼠[1]体重18至20g的雌性FVB小鼠以6只为一组饲养。将含有VEGF（2μg/ mL）的0.5mL 0.8％w / v琼脂（含有肝素，20U / mL）的多孔腔皮下植入小鼠的侧腹（每组n = 6）。 VEGF诱导腔室周围血管化组织的生长。该反应是剂量依赖性的，可以通过测量组织的重量和TIE-2水平来量化。在植入室之前4-6小时开始每天一次口服化合物或载体（PEG200 100％，5mL / kg）处理小鼠并持续4天。在最后一次给药后24小时处死动物以测量血管化组织。取组织重量，然后制备用于TIE-2ELISA分析的裂解物。大鼠[1]将导管植入用于BFH772和BAW2881的幼稚雌性大鼠OFA的股动脉和静脉中，或在雌性Sprague-Dawley大鼠的颈静脉和股动脉中植入化合物4,9和10的动物。允许恢复96小时，并且被安置在单个笼子中，在整个实验过程中可以自由获取食物和水。雌性OFA大鼠接受溶于乙醇/二甲基异山梨醇/聚乙二醇400 / D5W（10/15/35/40 v / v）的2.5 mg / kg BAW2881或溶于N-甲基吡咯烷酮/聚乙二醇200的1 mg / kg BFH772（30 ：70，v / v）通过注入股静脉。 D5W是葡萄糖5％/水（v / v）。口服给药：将BAW2881和BFH772配制成微粉化悬浮液（溶于/悬浮在蒸馏水中的0.5％羧甲基纤维素中）并通过强饲法给予雌性OFA大鼠，以给予BAW2881或3mg / kg BFH772 25mg / kg的剂量。 （每组n = 4只大鼠）。对于化合物4,9和10,8周龄的雌性Sprague-Dawley大鼠接受静脉内剂量3mg / kg 4,9和10，配制成乙醇/ NMP /聚乙二醇400 / D5W（10/10 / 50/30）（每组n = 2只大鼠），或以50mg / kg给药的0.5％羧甲基纤维素在蒸馏水中的悬浮液（每组n = 3只大鼠）。在规定的时间，将血液样品收集到肝素化管中，并通过HPLC / MS-MS测定血浆中化合物的量。

[1]. Bold G, et al. A Novel Potent Oral Series of VEGFR2 Inhibitors Abrogate Tumor Growth by Inhibiting Angiogenesis. J Med Chem. 2016 Jan 14;59(1):132-46.

尼达尼布 | 1,3-二氢-3-[(3,5-二甲基-1H-吡咯-2-基)亚甲基]-2H-吲哚-2-酮 | 甲磺酸阿帕替尼 | PD173074 | Foretinib | 3-四聚丙烯基二氢-2,5-呋喃二酮 | 利尼伐尼 | 西地尼布 | 6-[[7-[(1-氨基环丙基)甲氧基]-6-甲氧基-4-喹啉基]氧基]-N-甲基-1-萘甲酰胺 | RAF265 | 盐酸巴多昔芬 | SU14813 | 多韦替尼 | SAR131675 | 瓦他拉尼