PF-9366

PF-9366 是一种有效的甲硫氨酸腺苷转移酶 (Mat2A) 抑制剂,IC50 值和 Kd 值分别为 420 nM 和 170 nM。

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研究领域 >> 癌症

IC50: 420 nM (Mat2A)[1] Kd: 170 nM (Mat2A)[1]

PF-9366是一种Mat2A抑制剂,IC50为420 nM,Kd为170 nM。 PF-9366在GPCR,神经转运蛋白,磷酸二酯酶和离子通道中没有显着的脱靶活性。 PF-9366对癌细胞中的Mat2A具有抑制活性。 PF-9366在H520肺癌细胞中抑制细胞S-腺苷-L-甲硫氨酸(SAM)产生,IC50为1.2μM。 PF-9366在Huh-7细胞中对SAM合成更有效,IC50为255 nM,并且还抑制IC50为10μM的细胞增殖。

将Mat2A和Mat2B蛋白质广泛透析到含有150mM KCl，25mM HEPES，pH 7.4,5mM MgCl 2,5％（v / v）甘油，2mM TCEP的缓冲液中。用分光光度法测定浓度，Mat2A的ɛ280为44,350 / M.cm，Mat2B的ɛ280为36,440 / M.cm。将化合物（PF-9366）从100％DMSO原液稀释到不含DMSO的缓冲液中。在典型实验中，将19μL15μL200μM化合物或30-35μMMat2B注射在VP ITC上制成10μMMat2A，或在Auto iTC200上将19μL2μL化合物注射到10μMMat2A中。分析数据并使其适合简单的1：1结合模型[1]。

将Huh-7细胞以每孔15,000个细胞的浓度接种，与化合物（PF-9366）孵育6小时，每孔4,000个细胞，与96孔板中的化合物在200μL生长培养基中孵育72小时。将NCI-H520 MAT2B敲低细胞以每孔20,000个细胞的浓度接种6小时，或每孔10,000个细胞，与96孔板中的化合物在200μL生长培养基中孵育72小时。使细胞在37℃，5％CO 2下过夜。从生长培养基中的粉末原料中新鲜制备5×环亮氨酸溶液。使用三倍稀释方案将其他化合物（PF-9366）在100％DMSO中稀释，并在生长培养基中进一步稀释，得到0.5％DMSO终浓度。使用IncuCyte Zoom活细胞成像仪监测每个细胞系的细胞汇合的一致性。使用CellTiterGlo试剂测量增殖。在化合物处理后从细胞板上除去生长培养基，并加入在PBS中1：1稀释的80μL/孔CellTiter Glo。通过Plate Reader [1]测量发光。

[1]. Quinlan CL, et al. Targeting S-adenosylmethionine biosynthesis with a novel allosteric inhibitor of Mat2A. Nat Chem Biol. 2017 Jul;13(7):785-792.

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