1-[4-[3-乙基-7-(吗啉-4-基)-3H-[1,2,3]三唑并[4,5-d]嘧啶-5-基]苯基]-3-[4-[(4-甲基哌嗪-1-基)羰基]苯基]脲

PKI-402 是一种有效的 PI3K 和 mTOR 抑制剂,抑制 PI3Kα, mTOR, PI3Kβ, PI3Kδ 和 PI3Kγ,IC50 分别为 2, 3, 7, 14 和 16 nM。

研究领域 >> 癌症

PI3Kα:2 nM (IC50)

PI3Kα-H1047R:3 nM (IC50)

PI3Kα-E545K:3 nM (IC50)

PI3Kβ:7 nM (IC50)

PI3Kδ:14 nM (IC50)

PI3Kγ:16 nM (IC50)

mTOR:3 nM (IC50)

PKI-402是I类PI3K的等效抑制剂,包括E545K和H1047R PI3K-α突变体(分别对于PI3Kα,PI3Kα-H1047R和PI3Kα-E545K,IC50 = 2,3和3nM)。 PKI-402引起来自多种人肿瘤组织的人肿瘤细胞系的体外生长抑制,所述人肿瘤组织包括乳腺,脑(神经胶质瘤),胰腺和非小细胞肺癌(NSCLC)组织。 PKI-402抑制MDA-MB-361 [乳腺癌：Her2 +和PIK3CA突变体(E545K)],IC50为6 nM。 PKI-402抑制HCT116(K-Ras和PIK3CA突变体),IC50为33 nM [1]。

PKI-402在乳腺[MDA-MB-361：Her2 +和PIK3CA(E545K)],神经胶质瘤(U87MG和PTEN)和NSCLC(A549; K-Ras和STK11)异种移植模型中显示抗肿瘤活性(静脉内途径)。 PKI-402导致MDA-MB-361异种移植模型的消退。 PKI-402效应在100mg/kg(每天持续5天,一轮)时最明显,这降低了初始肿瘤体积并防止肿瘤再生长70天。在MDA-MB-361肿瘤组织中,100mg/kg(单剂量)的PKI-402在8小时时在T308和S473位点完全抑制p-Akt并诱导切割的PARP。在24小时,p-Akt抑制仍然明显,如切割的PARP [1]。

酶测定以荧光偏振（FP）格式进行。人类I类PI3K和PI3K-α突变体（E545K和H1047R）在Sf9中产生。 GST-GRP1（鼠）在大肠杆菌中产生并通过GST-Sepharose分离。测定缓冲液是反应缓冲液[20mM HEPES（pH 7.1），2mM MgCl 2,0.05％CHAPS和0.01％β-巯基乙醇]和终止/检测缓冲液[100mM HEPES（pH 7.5），4mM EDTA，0.05％CHAPS） ]。 FP反应在室温下在20μL含有20μM磷脂酰肌醇4,5-二磷酸（PIP2），25μMATP和<4％DMSO（化合物溶剂）的反应缓冲液中进行30分钟。用20μL终止/检测缓冲液（10nM探针和40nM GST-GRP）终止FP反应，2小时后收集数据。 PKI-402的选择性在每个酶的[ATP] = Km的236人激酶组中进行评估[1]。

MDA-MB-361，MDA-MB-468，T47D，MCF7，BT474，HT29，HCT116，DLD1，U87MG，H157，NCI-H460，A549，NCI-H1975，NCI-H1650，NCI-H2170，KB，786- 0，A498，MIA-PaCa-2和PC3细胞系在37℃下在供应商推荐的生长培养基中的5％CO 2培养箱中繁殖。使用CellTiter 96 AQueous增殖测定法测定细胞生长抑制。使用Wallac Victor2 V 1420多标记HTS计数器在72小时后收集数据。使用Cellomics ArrayScan VTI读数器在暴露60分钟PKI-402后定量U2OS细胞中的FOXO-GFP易位[1]。

小鼠[1] PKI-402或载体通过静脉内途径给药。使用携带MDA-MB-361肿瘤的裸鼠。计算肿瘤重量。对施用PKI-402的荷瘤雌性裸鼠进行药效学（生物标志物）测量。从安乐死的动物收集肿瘤或正常组织样品，匀浆，用冷（4℃）PBS洗涤两次，然后用细胞裂解缓冲液[1]处理。

[1]. Mallon R et al. Antitumor efficacy profile of PKI-402, a dual phosphatidylinositol 3-kinase/mammalian target of rapamycin inhibitor. Mol Cancer Ther. 2010 Apr;9(4):976-84.

雷帕霉素 | 3-甲基腺嘌呤 | LY294002 | 渥曼青霉素 | Alpelisib (BYL719) | Torin 1 | 5-[2,6-二(4-吗啉基)-4-嘧啶基]-4-(三氟甲基)-2-吡啶胺 | IPI549 | MHY1485 | 沙帕色替 | AZD8055 | 2-氨基-N-[2,3-二氢-7-甲氧基-8-[3-(4-吗啉基)丙氧基]咪唑并[1,2-c]喹唑啉-5-基]-5-嘧啶甲酰胺 | 艾代拉里斯 | Dactolisib (BEZ235) | 槲皮素