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BCECF, AM pH荧光探针

更新时间:2025-07-30 11:02:31

常用名 BCECF-AM CAS号 117464-70-7
价格 ¥需询单/1mg ¥需询单/5mg ¥需询单/25mg 纯度 95.0%
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产品描述


BCECF, AM是一种检测细胞质pH值的荧光探针。具有细胞膜渗透性,进入细胞后被胞内酯酶水解生成BCECF,一种极性荧光衍生物从而被保留在细胞内。 BCECF在细胞内稳定,排出半衰期超过2小时。胞内pH测定通过比率成像实现,通过确定pH依赖性的发射光强度比率,使用荧光分光光度法或流式细胞仪检测皆可。

BCECF,AM主要用于哺乳动物细胞,也用于植物细胞、酵母等的细胞pH水平检测。
BCECF, AM还能用于包括钾离子在内的其他离子的胞内变化检测。


参数信息

英文名称:2′,7′-Bis(2-carboxyethyl)-5(6)-carboxyfluorescein acetoxymet
中文名称:2',7'-二-(2-羧乙基)-5(6)-羧基荧光素乙酰甲酯
CAS NO:117464-70-7
分子式:C40H36O19
分子量:820.70
闪点:85°C
沸点:692.41°C
密度:1.2837
状态:橙色固体
Ex/Em:503/528
溶解性:溶于乙腈,DMSO,DMF
纯度:≥95%
储存条件:-20℃避光干燥


体外研究

处理的细胞显示氢基因体,其电子密度沉积物以不同程度聚集。在某些情况下,在氢酶体内部可见染色。显微镜下还观察到,K+/H+离子载体尼日利亚菌素不抑制氢基因体装载BCECF-AM。ph敏感荧光染料测定细胞质ph值。在DMSO.2中配制2至20 mM的BCECF-AM原液。在缓冲溶液中制备5-50 μM BCECF-AM染料上样液。
3在细胞板中加入1000 μL/孔(6孔)、100 μL/孔(96孔)或25 μL/孔(384孔)的BCECF-AM上染液。将上染板在细胞培养箱中培养30-60分钟。洗净,用缓冲液替换染料上料液。通过在Ex/Em = 490/535 nm或430/535 nm处监测荧光来运行pH测定。

细胞实验
 
PASMCs被放置在层流细胞室中,灌注了pH调节到7.4的HBSS。pHi是用ph敏感荧光染料BCECF-AM的膜渗透形式在37°C、20%O2-5% CO2气氛下培养60分钟的细胞中测量的。然后用HBSS在37°C下洗涤细胞15分钟,以去除细胞外染料,并使胞质染料完全去酯化。BCECF荧光的比例测量是在一个工作站进行的,该工作站由Nikon TSE 100椭圆倒置显微镜组成,带有外延荧光附件。氙灯的光束在490 nm和440 nm处经过干涉滤光片过滤,通过20倍荧光物镜聚焦到PASMCS上进行检测。从细胞发射的530纳米的光通过物镜返回,并由成像相机检测。使用电子快门来减少染料的光漂白。pHi是根据每次实验后的现场校准估计的。细胞灌注含有(mM): 105 KCl, 1 MgCl2, 1.5 CaCl2, 10葡萄糖,20 HEPES-Tris和0.01尼日利亚菌素的溶液,以使pHi与外部ph平衡。当pHi用KOH从6.5调整到7.5时,通过荧光测量产生两点校准。细胞内H+离子浓度([H+]i)由pHi计算,公式为pHi = - log ([H+]i)。
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西安强化生物科技有限公司

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