| 描述 |
Amyloid beta-peptide(25-35) 是阿尔茨海默氏淀粉样蛋白β肽的Aβ(25-35) 片段,在培养细胞中显示出神经毒性活性。
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| 相关类别 |
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| 体外研究 |
Aβ(25-35)肽的氨基酸序列是NH2-Gly-Ser-Asn-Lys-Gly-Ala-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-COOH,其中第一个Gly代表氨基酸25和最后Met代表氨基酸35.淀粉样蛋白β-肽(25-35)也是首次以凝胶状态进行研究。还使用振动吸收和ECD进行比较研究。还使用振动吸收和VCD光谱研究了Aβ(25-35)肽膜的构象偏好[1]。淀粉样蛋白β肽(25-35)诱导对分离的脑线粒体的凋亡作用和甲硫氨酸-35的氧化还原状态,在诱导程序性细胞死亡途径和毒性事件中起关键作用[2]。
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| 体内研究 |
大脑脑室内注射Aβ25-35肽,随后每天一次给予化合物丹参(CDS),持续23天。使用Morris水迷宫和被动回避监测大鼠的行为。实时PCR和Western blotting用于测定海马中淀粉样蛋白前体蛋白(APP),β位点APP裂解酶-1(BACE1),早老素-1(PS1),胰岛素降解酶(IDE)和脑啡肽酶(NEP) 。阿尔茨海默病(AD)模型组存在空间学习和记忆障碍。与AD模型组相比,CDS和多奈哌齐给药显着改善了Morris水迷宫中的Aβ25-35肽诱导的记忆障碍(P <0.05)和被动回避任务(P <0.01)[3]。
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| 细胞实验 |
细胞活力通过改良的MTS测定法测定，该测定法基于线粒体脱氢酶将四唑鎓盐转化为在490nm处可用分光光度法测量的甲product产物。将PC12细胞以10000个细胞/孔的密度接种在96孔板中，并在完全培养基中保持16小时。然后在不存在（对照）的情况下孵育细胞，并且存在40μMAβ（31-35）和Aβ（25-35），其中使用还原的，氧化的和正亮氨酸取代的甲硫氨酸-35星形孢菌素10μM作为100％的阳性对照。细胞死亡。在肽孵育48小时后，向每个孔中加入20μLMTS试剂（2.0mg / mL）。然后将细胞在37℃，5％CO 2培养箱中孵育30-45分钟。加入25μL10％SDS终止反应。用酶标仪在490nm处读板。每个数据点使用三联孔试验获得[2]。
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| 动物实验 |
大鼠[3]使用54只雄性Sprague-Dawley大鼠（2个月大，300-350g）。将淀粉状蛋白β-肽（25-35）溶解在无菌蒸馏水中，浓度为1mg / mL，作为放养溶液。动物注入5μL/侧无菌蒸馏水（对照），聚集Aβ25-35（2μg/μL），以1μL/ min的速率注入双侧脑侧脑室;将针留在原位5分钟。然后取出针头，将大鼠放在温暖的垫子上直到它们被唤醒。为了确定对AD大鼠的神经保护作用，用不同剂量的CDS和多奈哌齐每天一次处理Aβ25-35处理的大鼠，持续23天（包括行为测试的持续时间）。使用Morris水迷宫和逐步被动回避任务，进行实验以测试CDS对Aβ25-35诱导的记忆障碍的影响。具体地，将所有大鼠随机分成6组用于实验：（a）载体1（用于Aβ25-35）+载体2（用于CDS和多奈哌齐），（b）Aβ25-35+载体2，（c） Aβ25-35+ CDS（130 mg / kg），（d）Aβ25-35+ CDS（260 mg / kg），（e）Aβ25-35+ CDS（520 mg / kg），（f）Aβ25-35+多奈哌齐（0.5毫克/千克）。在Aβ25-35（10μg/侧）或其载体的脑室微量输注后一天，在Morris水迷宫开始之前每天一次处理大鼠（CD）或多奈哌齐或载体2（ig），持续14天，然后是被动回避任务。
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| 参考文献 |
[1]. D'Ursi AM, et al. Solution structure of amyloid beta-peptide (25-35) in different media. J Med Chem. 2004 Aug 12;47(17):4231-8. [2]. Clementi ME, et al. Abeta(31-35) and Abeta(25-35) fragments of amyloid beta-protein induce cellular death throughapoptotic signals: Role of the redox state of methionine-35. FEBS Lett. 2005 May 23;579(13):2913-8. [3]. Liu M, et al. Cognitive improvement of compound danshen in an Aβ25-35 peptide-induced rat model of Alzheimer's disease. BMC Complement Altern Med. 2015 Oct 23;15:382.
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