| 描述 |
MLCK inhibitor peptide 18 是一种有效的 MLCK 抑制剂,IC50 值为 50 nM,同时较弱抑制 CaM kinase II 的活性。
|
| 相关类别 |
|
| 靶点 |
IC50: 50 nM (MLCK)[1]
|
| 体外研究 |
MLCK抑制剂肽18对MLCK对肽底物的利用具有选择性作用,不干扰CaM对激酶的激活,对密切相关的CaMPKII没有显着的抑制活性,并且不抑制PKA [1]。
|
| 激酶实验 |
所有测定均在50μL的终体积中进行。每个点一式两份进行测试。标准测定条件为50 mM HEPES，0.2 mM [γ-32P] ATP（比活度200-300 cpm / pmol），1 mM DTT，1 mg / mL牛血清白蛋白，5 mM MgCl 2,150 mM KCl，15 mM NaCl，pH 7.5，含或不含抑制剂。合成底物浓度，MLCK的KKRPQRATSNVFAM-NH2，CaMPKII的PLRRTLSVAA-NH2和PKA的LRRASLG，为20μM。通过添加5μL酶（PKA）或酶：CaM复合物（用于MLCK和CaMPKII）开始反应。酶：CaM复合物通过在1μMCaM和5μMCaCl2（对于MLCK）或30μMCaM和2mM CaCl 2（对于CaMPKII）的存在下在冰中孵育1分钟来进行。 MLCK的测定条件为20分钟，25℃; CaMPKII的温度为8分钟，25℃; PKA为6分钟，25℃。将每个反应管的等分试样点在磷酸纤维素滤纸中。将滤膜在75mM磷酸溶液中洗涤，然后用95％乙醇洗涤，干燥，并置于含有10mL Ecoscint O的小瓶中。通过在Beckman 6500液体闪烁计数器中计数小瓶来测定放射性。没有应用淬火校正。将数据转化为最大酶活性的百分比，其中不存在抑制剂时的酶活性取为100％。通过对应于最大活性的15％-85％的数据点的线性回归数据分析来计算ICsub> 50的值。此分析使用InPlot 4.0版完成。
|
| 参考文献 |
[1]. Lukas TJ, et al. Identification of novel classes of protein kinase inhibitors using combinatorial peptide chemistry based on functional genomics knowledge. J Med Chem. 1999 Mar 11;42(5):910-9.
|
