| 描述 |
SPL-707是有效的,选择性的和口服可用的信号肽肽酶样2a (SPPL2a) 抑制剂,IC50 值为80 nM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
IC50: 80 nM (SPPL2a)[1]
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| 体外研究 |
SPL-707的选择性比SPP高25倍,IC50为3.7μM,SPPL2a优于SPPL2b,选择性3倍,比较不同蛋白酶的可比测定形式产生的IC50值[1]。
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| 体内研究 |
SPL-707以≤10mg/ kg bid po的剂量显着抑制啮齿动物中SPPL2a底物CD74/p8片段的加工。以≥10mg/ kg bid口服给药SPL-707 11天,概括了在Sppl2a敲除(ko)和ENU突变小鼠(特定B细胞和骨髓树突细胞数量减少)中观察到的表型[1]。
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| 细胞实验 |
编码人Notch1-VP16-Gal4融合蛋白的DNA载体和用于γ-分泌酶RGA或人SPPL2a，VP16-TNFa（aa1-76）-NTF底物的Gal4-荧光素酶报告基因，以及用于SPPL2a的Gal4-荧光素酶报告质粒。使用FuGENE在HEK293细胞中瞬时转染RGA。转染后，将细胞悬浮液稀释并以10000个细胞/50μL/孔分配至白色固体384孔板。 3小时后，将200nL的DMSO中的SPL-707以浓度响应冲压到孔中，覆盖最终抑制剂浓度为10μM至0.3nM，一式三份。随后，将板在37℃，5％CO 2下在潮湿的培养箱中孵育24小时，然后加入30μLBrightGlo。在室温下孵育5分钟后，测量发光并通过绘制化合物浓度与标准化发光值[1]的关系来确定IC 50值。
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| 动物实验 |
大鼠[1]雌性Lewis大鼠接受SPL-707（1,3,10和30mg / kg bid; 0小时第一剂，8小时第二剂）。然后在第二次给药后16小时（总共24小时），通过Western印迹分析测量血液和脾细胞提取物中CD74 / p8的积累来评估SPPL2a的抑制[1]。小鼠[1]小鼠接受150mg / kg 31或1,3,10和30mg / kg 40的单次口服剂量。然后在给药后16小时，通过测量脾细胞裂解物中的CD74 / p8积累来评估SPPL2a的抑制。蛋白质印迹分析[1]。
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| 参考文献 |
[1]. Velcicky J, et al. Discovery of the First Potent, Selective, and Orally Bioavailable Signal Peptide Peptidase-Like 2a (SPPL2a) Inhibitor Displaying Pronounced Immunomodulatory Effects In Vivo. J Med Chem. 2018 Feb 8;61(3):865-880.
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