| 描述 |
SR-18292 是一种 PPARγ 共激活因子-1α (PGC-1α) 抑制剂,可促进 PGC-1α 乙酰化,抑制糖异生基因的表达,并减少肝细胞中葡萄糖的产生。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
PGC-1α[1]
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| 体外研究 |
转录共激活因子PGC-1α通过共激活调节脂肪和葡萄糖代谢的转录因子在能量稳态中起关键作用。 SR-18292增加PGC-1α与乙酰转移酶GCN5的相互作用,并减少PGC-1α对核激素受体HNF4α的共活化。 SR-18292抑制HNF4α/ PGC-1α糖异生转录功能。通过增加GCN5与PGC-1α的相互作用,SR-18292增加了特定PGC-1α赖氨酸残基的乙酰化,这可能随后降低其糖异生活性[1]。
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| 体内研究 |
SR-18292降低空腹血糖,增加肝脏胰岛素敏感性并改善糖尿病小鼠的葡萄糖稳态。高脂肪饮食(HFD)喂养的小鼠,肥胖和T2D的饮食模型,通过IP注射连续3天用SR-18292(45mg/kg)治疗,并且在测量空腹血糖之前在第4天再次治疗。引人注目的是,与匹配的媒介物处理的对照小鼠相比,用SR-18292治疗的小鼠具有显着更低的空腹血糖浓度水平。糖异生基因表达的诱导是对禁食反应的调节成分。重要的是,从用SR-18292治疗的小鼠中分离的肝脏中,糖异生基因表达,特别是Pck1的表达受到抑制[1]。
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| 激酶实验 |
为了测定GCN5 HAT活性，用SR-18292（10μM）处理过表达Ad-GCN5的U-2 OS细胞18小时。用缓冲液B（20mM HEPES-KOH（pH 7.9），125mM NaCl，1mM EDTA，1mM DTT，1％IGEPAL（v / v），10％甘油（v / v），5mM NaF裂解细胞）。 ，5mMβ-甘油磷酸盐，5mM丁酸钠和10mM烟酰胺），补充有蛋白酶抑制剂混合物。在用裂解缓冲液多次洗涤后，FLAG-GCN5在4℃下用FLAG珠免疫沉淀过夜。然后使用3×FLAG肽洗脱GCN5，并使用HAT抑制剂筛选测定试剂盒[1]将纯化的蛋白质用于测定HAT活性。
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| 细胞实验 |
为了使用MTT测定细胞活力，将原代肝细胞以20,000个细胞/孔接种在96孔板上。第二天，如所示，以不同剂量处理细胞，用于原代肝细胞的18小时处理。然后向每个孔中加入5μLMTT试剂（5mg / mL）（n = 4 /剂量），并将细胞在37℃温育1小时。弃去培养基，通过向每个孔中加入100μLDMSO来提取染料。对于使用ToxiLight非破坏性细胞毒性生物测定的细胞毒性测定，将肝细胞接种在6孔板上并用SR-18292（20μM）或顺铂（50μM）处理18小时。收集50μL培养基并通过加入100μl腺苷酸激酶检测试剂并在室温下孵育5分钟然后测量发光来测量细胞毒性[1]。
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| 动物实验 |
小鼠[1]对于使用DIO小鼠的体内研究，给6-8周龄的雄性动物喂食高脂肪饮食（HFD）指定的时间。对于药物施用，在下午4-5点之间通过IP注射SR-18292（45mg / kg）3天，并且在第3天下午5点取出食物。第二天早晨（第4天）再次注射SR-18292（总共4次注射）并在3小时后测量血糖。每只小鼠的注射量不超过275μL[1]。
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| 参考文献 |
[1]. Sharabi K, et al. Selective Chemical Inhibition of PGC-1α Gluconeogenic Activity Ameliorates Type 2 Diabetes. Cell. 2017 Mar 23;169(1):148-160.e15.
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