| 描述 |
Atrasentan hydrochloride 是一种有效的内皮素受体 (endothelin receptor) 拮抗剂,抑制 ETA 的活性,IC50 值为 0.0551 nM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
IC50: 0.055 nM (ETA)
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| 体外研究 |
Atrasentan(ABT-627,0-50μM)显着抑制LNCaP和C4-2b前列腺癌细胞生长。与Taxotere合并的ABT-627相对于单独的任一种药物引起显着更大的活前列腺癌细胞损失,并且显示出更大程度的NF-κBDNA结合活性的下调[2]。 Atrasentan深刻诱导了几种CYP和药物转运蛋白(例如,在50μM时诱导CYP3A4的12倍)。它是一种中度P-gp抑制剂(P388/dx细胞中IC50 = 15.1±1.6μM)和弱BCRP抑制剂(MDCKII-BCRP细胞中IC50 = 59.8±11μM)[3]。
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| 体内研究 |
Atrasentan(3 mg/kg,po)可抑制大鼠内皮素-1(1 nmol/kg)诱导的升压反应[1]。 Aatrasentan(ABT-627,10 mg/kg,ip)以及Taxotere单独在SCID-hu模型中在一定程度上抑制了骨内环境中的C4-2b肿瘤生长[2]。
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| 激酶实验 |
将细胞培养并用Atrasentan处理。然后将它们用PBS洗涤两次并在冰冷的裂解缓冲液[20mM Tris（pH 7.4），150mM NaCl，1％Triton X-100,1mM EDTA，1mM EGTA，2.5mM PPi，1mM中裂解）。 β-甘油磷酸盐，1mM原钒酸钠，1μg/ mL亮抑酶肽和1mM PMSF]。离心提取物以除去细胞碎片，并使用二辛可宁酸（BCA）蛋白质测定试剂测定上清液的蛋白质含量。将蛋白质（150μg）在4℃温和摇动下孵育过夜，其中固定的Akt抗体与琼脂糖酰肼珠交联。从细胞裂解物中选择性地免疫沉淀Akt后，用裂解缓冲液洗涤免疫沉淀产物两次，用激酶测定缓冲液[25mM Tris（pH 7.5），10mM MgCl 2,5mM磷酸甘油酯，0.1mM原钒酸钠洗涤两次） ，2mM DTT]，然后重悬于40μL含有200μMATP和1μgGSK-3α/β融合蛋白的激酶测定缓冲液中。使激酶测定反应在30℃下进行30分钟并通过加入Lamelli SDS样品缓冲液终止。通过10％SDS-PAGE分离反应产物，然后用抗磷酸化的GSK-3α/β抗体进行Western印迹。为了分析Akt的总量，通过10％SDS-PAGE分离来自裂解物样品的40μg蛋白质，然后用抗Akt抗体进行Western印迹。
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| 细胞实验 |
将所有三种前列腺癌细胞系（LNCaP，C4-2b和PC-3细胞）以每孔3×103个细胞的密度接种在96孔微量滴定培养板中。孵育过夜后，除去培养基并用含有从10mM原液稀释的不同浓度的ABT-627（0-50μM）的新鲜培养基替换。与药物一起温育72小时后，向每个孔中加入20μLMTT溶液（PBS中5mg / mL）并进一步温育2小时。终止后，吸出上清液，将由代谢活细胞形成的MTT甲and溶解在异丙醇（100μL）中。将板在旋转振荡器上混合30分钟，并在读板器上在595nm处测量吸光度。
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| 动物实验 |
将YM598（0.3,1和3mg / kg），atrasentan（0.3,1和3mg / kg）或0.5％甲基纤维素作为载体用给药套管口服给予大鼠。测试物质和载体的剂量体积设定为5mL / kg。给予化合物约20分钟后，用戊巴比妥钠麻醉大鼠，然后在给药后30分钟进行捣碎和通气。口服给药化合物约1小时后，静脉内给予大内皮素-1（1nmol / kg），并测量血压。在这两个实验中，通过线性回归分析确定引起50％抑制（ID50）的大内皮素-1诱导的舒张压增加的试验化合物的剂量。
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| 参考文献 |
[1]. Yuyama H, et al. Superiority of YM598 over atrasentan as a selective endothelin ETA receptor antagonist. Eur J Pharmacol. 2004 Sep 13;498(1-3):171-7. [2]. Banerjee S, et al. In vitro and in vivo molecular evidence for better therapeutic efficacy of ABT-627 and taxotere combination in prostate cancer. Cancer Res. 2007 Apr 15;67(8):3818-26. [3]. Weiss J, et al. Interaction potential of the endothelin-A receptor antagonist atrasentan with drug transporters and drug-metabolising enzymes assessed in vitro. Cancer Chemother Pharmacol. 2011 Oct;68(4):1093-8.
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