| 描述 |
RIPA-56是一种高效选择和代谢稳定的受体相互作用蛋白1 (RIP1) 抑制剂, 其中IC50值为13nM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
IC50: 13 nM (RIP1)[1]
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| 体外研究 |
RIPA-56在人肝微粒体稳定性测定中具有128分钟的半衰期,并且在TSZ诱导的HT-29坏死测定中具有28nM的EC50。 RIPA-56还显示出保护鼠L929细胞免受TZ诱导的坏死(EC50 = 27nM)的效力。 RIPA-56显示出对RIP1激酶活性的有效抑制,IC50为13nM,并且在10μM浓度下没有抑制RIP3激酶活性。 RIPA-56可以通过苯基和2,2-二甲基丁基与RIP1形成紧密的疏水相互作用,形成两个重要的氢键[1]。
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| 体内研究 |
在SIRS小鼠疾病模型中,RIPA-56有效降低肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导的死亡率和多器官损伤。与已知的RIP1抑制剂相比,RIPA-56在人和鼠细胞中都是有效的,在体内更稳定,并且在动物模型研究中是有效的。 RIPA-56在小鼠体内具有令人印象深刻的PK特征,半衰期为3.1小时,口服生物利用度(PO)为22％,腹腔注射(IP)的生物利用度为100％[1]。
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| 激酶实验 |
RIP1激酶测定在白色384孔板中进行。首先将RIP1与RIPA-56或DMSO对照孵育15分钟，然后加入ATP / MBP底物混合物以引发反应。 ATP的最终浓度为50μM，MBP为20μM。在室温下反应90分钟后，加入ADP-Glo试剂和检测溶液。 RIP3激酶测定条件几乎与RIP1测定相同，除了测定缓冲液含有5mM MgCl 2而不是20mM MgCl 2和12.5mM MnCl 2。在PerkinElmer Enspire [1]上测量发光。
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| 细胞实验 |
细胞坏死测定在96孔细胞培养板中进行。在每个孔中铺板3,000个细胞并在37℃下培养过夜。用20ng /mLTNFα/ 100nM Smac Mimetics /20μMz-VAD-FMK和RIPA-56处理HT-29细胞24小时。用20ng /mLTNFα/20μMz-VAD-FMK和RIPA-56处理L929细胞6小时。使用Cell Titer-Glo发光细胞活力测定试剂盒[1]测定细胞存活率。
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| 动物实验 |
小鼠：在静脉内（IV），腹膜内（IP）或口服施用（PO）RIPA-56至C57BL / 6小鼠（n = 3）后，在不同时间点通过眼穿刺对血液取样。通过LCMS / MS分析血浆样品中的化合物浓度。在凤凰64 [1]中使用非房室分析从个体动物数据确定药代动力学参数。
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| 参考文献 |
[1]. Ren Y, et al. Discovery of a Highly Potent, Selective, and Metabolically Stable Inhibitor of Receptor-InteractingProtein 1 (RIP1) for the Treatment of Systemic Inflammatory Response Syndrome. J Med Chem. 2017 Feb 9;60(3):972-986.
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