| 描述 |
VER-246608 是一种有效的,ATP 竞争性的丙酮酸脱氢酶激酶 (PDK) 抑制剂,抑制 PDK-1,PDK-3,PDK-2,和 PDK-4,IC50 分别为 35 nM,40 nM,84 nM 和 91 nM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
IC50: 35 nM (PDK-1), 40 nM (PDK-3), 84 nM (PDK-2), 91 nM (PDK-4)[1]
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| 体外研究 |
VER-246608是PDK的新型泛同种型ATP竞争性抑制剂。在基于DELFIA的酶功能测定中,VER-246608在亚100nM范围内表现出相似的所有四种PDK同种型的效力。就细胞生物标志物调节而言,VER-246608抑制E1α的Ser293残基的磷酸化(被所有四种PDK同工酶磷酸化),IC50值为266nM。用9μM和27μMVER-246608处理PC-3细胞导致培养1小时后培养基L-乳酸水平分别降低21％和42％。 VER-246608还降低了相同浓度下的D-葡萄糖消耗,导致L-乳酸产量降低。在10μM及以上的浓度下,球体体积减少约50％,表明与单层生长相比,VER-246608效力增加[1]。
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| 激酶实验 |
使用DELFIA测定试剂（测定缓冲液，洗涤缓冲液，增强溶液和抗兔IgG-Eu-N1二抗）和平板。将测试化合物在DMSO中进行10点三倍稀释，用MOPS缓冲液（60mM MOPS pH7.2,15mM乙酸镁，60mM KCl）稀释并加入酶混合物（10nM PDK-1,2和3）中。在96孔V底板中加入20nM PDK-4,300nM E1,0.1mg / mL BSA，1mM DTT。通过加入ATP至终浓度为5μM，然后在30℃温育1小时来引发反应。然后通过加入STOP溶液（50mM碳酸盐 - 碳酸氢盐缓冲液，pH9.6）终止反应，然后转移到96孔DEFLIA黄色板中。然后将板密封并在4℃温育o / n。然后通过与抗p（Ser293）E1α一抗孵育，接着抗兔二级IgG-Eu-N1抗体和添加增强溶液来实现p（Ser293）E1α水平的检测和定量。然后使用Victor2板读数器测量时间分辨荧光信号。在定制的ABASE（IDBS）协议中使用XLFIT4通过非线性回归拟合数据，以确定IC50值[1]。
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| 细胞实验 |
使用Sulforhodamine B测定法测定作为单层培养的细胞的化合物细胞毒性。对于球体生长实验，将PC-3细胞接种（500个细胞/孔）到含有2.5％（w / v）基质胶的RPMI-1640培养基中的96孔圆底板中。在接种后48小时，用VER-246608（2.5,5,10,20和40μM）处理所得的球状体。通过使用axiovision软件[1]在Zeiss Axiovert 200 M倒置显微镜上拍摄的图像获得直径测量值来确定球体体积。
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| 参考文献 |
[1]. Moore JD, et al. VER-246608, a novel pan-isoform ATP competitive inhibitor of pyruvate dehydrogenase kinase, disrupts Warburg metabolism and induces context-dependent cytostasis in cancer cells. Oncotarget. 2014 Dec 30;5(24):12862-76.
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