| 描述 |
GSK583 是一种高效,高选择性的 RIP2 Kinase 抑制剂,其 IC50 值为 5 nM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
IC50: 5 nM (RIP2K)[1]
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| 体外研究 |
GSK583(1μM)在包含p38α和VEGFR2的300种激酶组中表现出优异的选择性。 GSK583有效且剂量依赖性地抑制MDP刺激的肿瘤坏死因子-α(TNFα)产生,IC50为8nM。当GSK583在人全血(IC50 = 237 nM)和大鼠全血(IC50 = 133 nM)中的类似MDP诱导的TNFα产生测定中进行分析时,仅表现出适度的效力降低[1]。
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| 体内研究 |
GSK583(0.1,1和10 mg/kg,po)以剂量依赖性方式抑制大鼠血清KC(IL-8的啮齿动物直向同源物)水平,IC50来自大鼠血液浓度50 nM(或20毫微克/毫升)。同样,GSK583以剂量依赖的方式抑制血清KC水平和中性粒细胞向小鼠腹腔内的募集,其IC50为37 nM(15 ng/mL),来自小鼠血药浓度[1]。
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| 激酶实验 |
开发基于荧光偏振的结合测定以通过与荧光标记的ATP竞争性配体竞争来定量新的测试化合物在RIP2K的ATP结合口袋处的相互作用。全长FLAG His标记的RIP2K从杆状病毒表达系统中纯化，并且在最终测定浓度为KD表观的两倍时使用。使用与抑制剂可逆且竞争的荧光标记的配体，最终测定浓度为5nM。酶和配体均在50mM HEPES pH 7.5,150mM NaCl，10mM MgCl 2,1mM DTT和1mM CHAPS的溶液中制备。在100％DMSO中制备测试化合物，并将100nL分配到多孔板的各个孔中。接下来，在最终测定浓度的两倍下将5μLRIP2K加入到测试化合物中，并在室温下温育10分钟。温育后，将5μL荧光标记的配体溶液以最终测定浓度的两倍加入到每个反应中，并在室温下温育至少10分钟。最后，在能够测量荧光偏振的仪器上读取样品。测试化合物抑制表示为内部测定对照的抑制百分比（％）。对于浓度响应实验，使用以下四个参数逻辑方程拟合归一化数据：y = A +（（BC））/（1+（10x）/（10C）D），其中y是％活性（％抑制）在指定的化合物浓度下，A是最小活性％，B是最大活性％，C = log10（IC50），D =坡度，x = log10（化合物浓度[M]），pIC50 =（ - C） 。
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| 动物实验 |
小鼠[1]雌性C57Bl / 6小鼠（用于细胞因子分析）或雄性Balb / c小鼠（用于腹膜中性粒细胞分析）（n = 10 /治疗组）在MDP攻击前15分钟用载体或GSK583口服给药（0.1， 1或10毫克/千克）。对于腹膜中性粒细胞分析，在MDP攻击后4小时（30μg，腹膜内）处死小鼠，并通过灌洗收集腹膜液。腹膜中性粒细胞通过FACS分析定量。大鼠[1]雌性Crl：CD（SD）大鼠（n = 8 /治疗组）在MDP攻击前15分钟口服给予载体或GSK583（150μg/大鼠，IV）。在MDP攻击后2小时，处死大鼠并从通过心脏棒收集的血液制备末端血清。通过MSD平台定量血清细胞因子水平（IL-6，IL-8或KC，IL-1β和TNFα）。
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| 参考文献 |
[1]. Haile PA et al. The Identification and Pharmacological Characterization of 6-(tert-Butylsulfonyl)-N-(5-fluoro-1H-indazol-3-yl)quinolin-4-amine (GSK583), a Highly Potent and Selective Inhibitor of RIP2 Kinase. J Med Chem, 2016 May 26, 59(10):4867-80.
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