| 描述 |
OTS5144 是一种高效的 TOPK 抑制剂,IC50 为 2.6 nM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
IC50: 2.6 nM (TOPK)[1]
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| 体外研究 |
为了证实OTS514对TOPK的特异性,使用了一组60种不同的人蛋白激酶。在与0.2μMOTS514孵育2小时后测量每种激酶的活性。对TOPK(83.5％抑制)观察到最高抑制,而对其他激酶的抑制作用的平均值和SD分别为11.5和18.5％,表明OTS514的TOPK抑制作用的特异性。在来自各种癌症类型的癌细胞系中检查TOPK表达,例如肺癌(A549,LU-99),乳腺癌(DU4475,MDA-MB-231和T47D),伯基特淋巴瘤(Daudi),膀胱癌( UM-UC-3),结肠癌(HCT-116和HT29),胃癌(MKN1和MKN45),肝癌(HepG2),胰腺癌(MIAPaca-2)和前列腺癌(22Rv1)。除了HT29之外,在所有这些细胞系中都观察到TOPK的高表达。每种细胞系检测OTS514的生长抑制作用,发现强生长抑制作用,TOPK阳性癌细胞系的IC50值低至1.5至14nM。另一方面,难以检测到TOPK表达的HT29细胞的IC50值在170nM时显着更高(P = 5.92×10-11)[1]。
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| 体内研究 |
首先在A549细胞(TOPK阳性肺癌细胞)的异种移植模型中研究OTS514的体内抗肿瘤作用。每天一次静脉内施用1,2,5和5mg/kg的游离OTS514持续2周导致第15天的肿瘤生长抑制(TGI)分别为5.7,43.3和65.3％,没有任何体重减轻。在另一种LU-99细胞的肺癌异种移植模型中进一步研究了OTS514的抗肿瘤作用。每天一次静脉内给予OTS514(5mg/kg),持续2周,达到良好的生长抑制效果,TGI为104％,没有任何体重减轻。然而,尽管针对LU-99异种移植物的抗肿瘤作用强于针对A549异种移植物的抗肿瘤作用,但治疗仍然导致白细胞(WBC)的显着减少(P <0.01)[1]。
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| 细胞实验 |
CD34 + HSC在补充有20％胎牛血清和1×StemSpan CC100的RPMI中培养。用OTS514（20或40nM）或OTS-964（100或200nM）处理细胞48小时。用磷酸盐缓冲盐水（PBS）洗涤收集的细胞，并重悬于100μLPBS中，然后在室温下用CD41a抗体染色20分钟。最后，再次用PBS洗涤细胞，然后通过BD FACSCalibur上的流式细胞术分析CD41a染色。用抗STAT5抗体通过蛋白质印迹检测STAT5的表达[1]。
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| 动物实验 |
将小鼠[1] A549（1×107细胞）或LU-99细胞（5×106或1×107细胞）皮下注射到雌性BALB / cSLC-nu / nu小鼠的左胁腹中。当A549异种移植物达到200mm 3的平均体积或当LU-99异种移植物达到150或200mm 3的平均体积时，将动物随机分成6只小鼠的组。首先在A549细胞（TOPK阳性肺癌细胞）的异种移植模型中研究OTS514的体内抗肿瘤作用。在肿瘤大小达到约200mm 3后，将OTS514给予携带A549细胞的小鼠。用OTS514（1,2.5和5mg / kg）静脉内处理小鼠，每天一次，持续2周。测量肿瘤大小作为药物反应的替代标志物，并计算肿瘤生长抑制百分比（TGI）。在另一种LU-99细胞的肺癌异种移植模型中进一步研究了OTS514的抗肿瘤作用。在肿瘤大小达到约200mm 3后，将OTS514给予携带LU-99癌细胞的小鼠。每天一次用OTS514（5mg / kg）静脉内处理小鼠，持续2周。使用卡尺测定肿瘤体积。小鼠的体重被确定为同一天耐受性的指标[1]。
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| 参考文献 |
[1]. Matsuo Y, et al. TOPK inhibitor induces complete tumor regression in xenograft models of human cancer through inhibition of cytokinesis. Sci Transl Med. 2014 Oct 22;6(259):259ra145.
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