| 描述 |
BMS-5 是一种高效的 LIMK 抑制剂,抑制 LIMK1 和 LIMK2,IC50 分别为 7 nM 和 8 nM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
LIMK1:7 nM (IC50)
LIMK2:8 nM (IC50)
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| 体外研究 |
BMS-5在Nf2ΔEx2小鼠施旺细胞(MSC)中以剂量依赖性方式抑制cofilin-Ser3磷酸化,IC50为~2μM。 BMS-5以剂量依赖性方式降低Nf2ΔEx2MSC活力,IC50为3.9μM,但在相当的BMS-5浓度下不会显着降低对照Nf2flox2/flox2MSCs的活力。在10μMBMS-5时,Nf2ΔEx2MSC活力为40％,而对照组为83％[2]。
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| 体内研究 |
在情境恐惧条件训练后立即将BMS-5(20或200μM/侧)双侧输注到大鼠的海马中。在恐惧条件反射后48小时测试大鼠的记忆巩固。事后分析显示,与20μM和载体组相比,用200μMBMS-5处理的组表达较低的冷冻水平(P <0.01)[3]。
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| 激酶实验 |
使用Sf9细胞中的Bac-to-Bac系统将人LIMK1和LIMK2的蛋白激酶结构域表达为谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白。通过放射性磷酸盐掺入生物素化的全长人destrin中，测定化合物1至6（例如BMS-5）对LIMK1和LIMK2蛋白激酶活性的抑制。用25mM HEPES，100mM NaCl，5mM MgCl 2,5mM MnCl2,1μM总ATP，83μg/ mL生物素化脱落素，167ng / mL谷胱甘肽S-转移酶-LIMK1中的浓度系列化合物进行反应，或835 ng / mL谷胱甘肽S-转移酶-LIMK2，在室温下总体积为60μL，持续30分钟（LIMK1）或60分钟（LIMK2）。通过添加140μL的20％TCA / 100mM焦磷酸钠终止反应，并将沉淀物收获到GF / C unifilter板上。加入35μLMicroscint闪烁液后，使用TopCount测定掺入的放射性[1]。
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| 细胞实验 |
测量细胞膜不对称性。将以6孔格式铺板的Nf2ΔEx2MSCs与2μMBMS-5或DMSO载体一起温育24小时。收获细胞并测定。通过流式细胞术用Violet比率测定法评估质膜不对称性[2]。
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| 动物实验 |
大鼠[3]使用雄性Wistar大鼠（2-3个月龄，体重290-350g）。 BMS-5在载体溶液（1％DMSO的无菌等渗盐水中）中制备。在输注时，将30号输注针装配到引导插管中，其尖端突出超过引导插管端部1.0mm并且瞄准背海马CA1的锥体细胞层。 1μLBMS-5（20和200μM）或载体（DMSO 1％）的体积在90秒的时间内双侧输注。 BMS-5的剂量基于其IC50值和体外研究。
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| 参考文献 |
[1]. Ross-Macdonald P, et al. Identification of a nonkinase target mediating cytotoxicity of novel kinase inhibitors. Mol Cancer Ther. 2008 Nov;7(11):3490-8. [2]. Petrilli A, et al. LIM Domain Kinases as Potential Therapeutic Targets for Neurofibromatosis Type 2.Oncogene. Oncogene. 2014 Jul 3;33(27):3571-82. [3]. Lunardi P, et al. Effects of Hippocampal LIMK Inhibition on Memory Acquisition, Consolidation, Retrieval, Reconsolidation, and Extinction. Mol Neurobiol. 2017 Jan 13.
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