| 描述 |
PF-04991532 是一种有效的肝选择性葡萄糖激酶激活剂,在人类和大鼠中的 EC50 值分别为 80 和 100 nM。
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| 相关类别 |
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| 靶点 |
EC50: 80 nM (glucokinase in human), 100 nM (glucokinase in rat)[1]
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| 体外研究 |
PF-04991532是一种有效的肝脏选择性葡萄糖激酶活化剂,人体内EC50为80 nM,大鼠为100 nM,也是2期临床候选物。在用PF-04991532处理1小时的新鲜分离的原代大鼠肝细胞中进行的机理实验显示增加的2- [14 C] -脱氧葡萄糖摄取(EC 50 =1.261μM)和增加的葡萄糖氧化(EC 50 =5.769μM)。另外,PF-04991532以剂量依赖性方式降低1- [14 C] -乳酸葡萄糖的产生(EC 50 =0.626μM)。在分离的大鼠肝细胞中,与仅用100nM胰高血糖素处理的细胞相比,PF-04991532增加G6Pase的表达,并且在25mM葡萄糖,100nM胰高血糖素和PF-04991532存在下G6Pase mRNA表达的最大增加[1] 。
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| 体内研究 |
单剂量的PF-04991532增加葡萄糖输注速率以维持高血糖症。尽管血浆甘油三酯升高,但令人惊讶的是,给予19天PF-04991532的大鼠中的肝甘油三酯与载体处理的GK大鼠相同。在另外的治疗28天的队列中,在载体和给予PF-04991532的大鼠之间观察到相同的肝脏脂质浓度(载体：9.89±0.31; PF-04991532 100mg/kg：9.91±0.31)。在用PF-04991532处理的大鼠中,脂肪生成基因表达的表达增加,例如乙酰辅酶A羧化酶(ACC),ATP柠檬酸裂解酶(ACLY)和脂肪酸合酶(FAS)[1]。
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| 细胞实验 |
原代大鼠肝细胞用于确定G6Pase的表达。将50,000个新鲜分离的大鼠肝细胞在Williams E培养基中培养过夜，补充100nM地塞米松，1×ITS和1×PenStrep。第二天早晨吸出培养基，并改为DMEM无葡萄糖培养基，补充有5mM葡萄糖，25mM葡萄糖，1μM胰岛素，100nM胰高血糖素或10μMPF-04991532。 2小时后，吸出培养基，洗涤两次，并向细胞中加入100μLRLT。用RNeasy试剂盒[1]提取RNA。
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| 动物实验 |
在本研究中使用13周龄雄性Goto Kakizaki大鼠，其具有住院颈动脉和颈静脉导管。在运输前一天进行手术。抵达后，动物单独饲养，允许随意吃，并适应新环境6至7天。动物随机分配100mg / kg PF-04991532处理或载体对照处理，并以5mL / kg口服强饲。在实验当天，0.5％甲基纤维素载体用于载体处理的大鼠。使用胰岛素钳技术与[3-3H]葡萄糖组合在无应激，清醒，慢性导管插入的大鼠中进行研究。在体内研究结束时，对大鼠实施安乐死[1]。
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| 参考文献 |
[1]. Erion DM, et al. The hepatoselective glucokinase activator PF-04991532 ameliorates hyperglycemia without causing hepatic steatosis in diabetic rats. PLoS One. 2014 May 23;9(5):e97139.
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