MAFP

MAFP (Methyl Arachidonyl Fluorophosphonate) 是选择性,针对活性位点,不可逆的 cPLA2 和 iPLA2 抑制剂。 MAFP也是一种有效的不可逆的 anandamide amidase 抑制剂。

信号通路 >> 代谢酶/蛋白酶 >> 磷脂

研究领域 >> 神经疾病

研究领域 >> 心血管疾病

研究领域 >> 代谢疾病

cPLA2, iPLA2[1], Anandamide amidase[2]

MAFP以浓度依赖性方式抑制iPLA2,在4088℃下在P388D1细胞中预孵育5分钟后IC50为5μM。 cPLA是一种磷脂水解酶,使用丝氨酸-228残基的羟基作为其催化亲核试剂[1]。 MAFP也是anandamide酰胺酶的抑制剂和CB1大麻素受体的配体。 MAFP显示出对anandamide酰胺酶的选择性,其分别比对胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶的效力高约3000倍和30000倍。 MAFP取代[3H] CP-55940与CB1大麻素受体的结合,IC50为20 nM,而anandamide为40 nM [2]。

将MAFP溶解并稀释在DMSO中。为了研究MAFP对iPLA 2抑制的可逆性，首先使用来自Amicon的Centricon-10浓缩器将P388D1 iPLA 2浓缩约10倍。然后将浓缩的iPLA 2（20μL）与DMSO中的80μMMAFP或单独的DMSO（2μL）在40℃下预温育5分钟。取出2μL等分试样，随后将1500倍稀释到3 mL含有100μMDPPC（每50μL测定混合物200000 cpm），400μMTritonX-100,100 mM Hepes（pH 7.5），5 mM EDTA的测定混合物中，1mM DTT和0.8mM ATP。在指定的时间点，取出50μL等分试样并定量剩余的酶活性[1]。

使用约1×10 6个N18TG2完整神经母细胞瘤细胞测量细胞培养物中的anandamide酰胺酶的抑制。将实验细胞在1.5mL培养基中预孵育20分钟，所述培养基由含有青霉素，链霉素，庆大霉素，10％牛小牛血清的Fl2 / DMEM和MAFP（1,5,10,20nM）组成。对照细胞不含抑制剂。然后加入花生四烯酰基，继续培养1小时。细胞中[3H] anandamide的量通过液体闪烁计数来量化，所述液体闪烁计数从通过暴露于X射线胶片[2]鉴定的TLC板的适当区域刮下。

[1]. Lio YC, et al. Irreversible inhibition of Ca(2+)-independent phospholipase A2 by methyl arachidonyl fluorophosphonate. Biochim Biophys Acta. 1996 Jul 12;1302(1):55-60.

[2]. Deutsch DG, et al. Methyl arachidonyl fluorophosphonate: a potent irreversible inhibitor of anandamide amidase. Biochem Pharmacol. 1997 Feb 7;53(3):255-60.

U型73122 | D609 钾盐 | 达普拉缔 | 喹吖因二盐酸 | FIPI | 蜂毒肽 | 伐瑞拉迪 | CAY10650 | AA26-9 | ML348 | 丹参酮I | ML349 | 1-单壬烷-rac-甘油 | Lp-PLA2-IN-1 | 二硫代碳酸 rel-(-)-O-[(3aR,4R,5S,7R,7aR)-八氢-4,7-甲桥-1H-茚-5-基]酯钾盐